Diabetologia：激活但机制受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次成现去甲自身人微内到成现1改型哮喘针灸病症的方面赴援在儿童初就有良好的描绘，多个去甲自身人微内无病症的儿童中所有70%在人微内转化后10年内患上哮喘，而随访15年的儿童这一比重减不及到84%。相比较之下，占针灸1改型哮喘一半以上的改型1改型哮喘的得病的系统还从未得到充分的研究成果。

越来越多的人开始适用分段系统来定义1改型哮喘的方面：生物微在成现多种去甲自身人微内时踏入第1期中，成现血压间歇性时踏入第2期中，成现病症时踏入第3期中。一些多发去甲自身人微内无病症的生物微，在1期和2期，方面更快，并发展为得病的1改型哮喘。我们早先描绘了一第各别在首次检验到多种去甲自身人微内抽样后多于10年无哮喘的亦然比较慢方面者，这第各别患儿伤亡人数不及，但基本特征更加明确。随后，我们注意到去甲自身抗原免疫CD8+T肝细胞质子化将在方面比更快的患儿中所基本不长期存在，但在近期得病和长期长期存在的哮喘患儿中所很不易检验到。这确实暗示，与方面患儿相比较，这些患儿性疾病质子化将的调控提高。

早期研究成果暗示，尽管调控性T肝细胞(Treg)存量较长小时，但哮喘患儿长期存在一些系统缺陷，其中所包括对IL-2的质子化将意志力降低。此外，哮喘患儿中所的震荡CD4+T肝细胞确实对调控更具抵抗性，展现为震荡T肝细胞的抑止弱化，自然产生的Treg和灌注产生的诱导Treg，以及抗原年中的CD4+T肝细胞中所IL-2质子化将弱化。本研究成果的借此是描绘了CD4+调控性T肝细胞(Treg)在领头亦然比更快方面者中所的基本特征，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

方式：BOX研究成果是一项以一些人相结合的横向研究成果，在21岁请注意复发的患儿子女中所检查1改型哮喘的致命原因。我们早先描绘了长期比更快方面者的基本特征，他们始终保持多重去甲自身人微内无病症最多10年，但从未成现哮喘的针灸病症，比较慢性或非顺利进行性性疾病。随后，10名继续始终保持无哮喘并愿意提供大量血液抽样的比更快方面者纳入T和B肝细胞系统统计分析。在目前为止的研究成果中所，8名比较慢方面者(SP第各别)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的去甲自身人微内无病症。所有的自发性都东南面1改型哮喘方面的1期，尽管一些人随后挽回了去甲自身人微内对某些抗原的无病症质子化将，然而，一名患儿早已东南面2期多于6年，但从未成现针灸病症，一名患儿被诊断为哮喘，该人脑72岁，在采集科学研究抽样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在生物信息学中所对该NADPH顺利进行了除此以外检验。分开外周血单个核反应肝细胞(PBMCs)，改用多参数流式肝细胞忍术和T肝细胞抑止测试检验NADPH中所Treg的频赴援、遗传基因和系统。适用FlowSOM和CITRUS(聚类核反应对、比如说和转回)顺利进行无监督聚类统计分析，检验Treg遗传基因。

结果：与健康NADPH相比较，来自比较慢方面微的清醒CD4+T肝细胞的监督聚类表明，作用于的清醒CD4+ Treg频赴援减不及，与抗生素诱导的TNFR具微蛋白(GITR)解读减不及有关。一名HbA1c升高的患儿与方面比更快者和意味着的依此第各别相比较，Treg小曲各不相同。系统统计分析暗示，与健康NADPH相比较，来自比更快方面微的Treg介导的CD4+震荡T肝细胞抑止明显受损。展现为对震荡CD4+T肝细胞CD25和CD134解读的抑止减不及。

绘成1 全面性的遗传基因统计分析表明，CD4+Treg亚改型在比较慢方面字段中所减不及。由FlowSOM转化成的Treg二楼，群聚在来自所有NADPH的已逝CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标示成物解读核反应对成10个元簇:清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)适用9个相异Treg标示成转化成的10个元簇的MST。每个端口象征性一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在端口第各别外面着色。每个端口中所的饼绘成对此单个标示成的解读分级。(b)每个元聚类的热绘成，以表明整微标示成解读。(c, d)为HD第各别(c)和SP第各别(d)转化成绘成，以及FlowSOM标示成的每个元簇的孔洞。(e-l)相比较较核反应素为每个metacluster箱终点站绘成(核反应素> 0.05%)已确定为HD和SP第各别:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T肝细胞(l)。橙色红色象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于绘成形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘成2 适用CITRUS的预测模改型证实，Treg频赴援的减不及是方面比更快的标志。分级具微联(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP自发性和意味着的HD自发性在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的象征性性绘成。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利进行分开，精心设计FlowSOM群微。(b) HD(黑点)和SP(杂色)第各别以及NADPHSP 606(橙色)中所CD25+ cd127的频赴援概述绘成。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+具微联弟集的箱终点站绘成;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，箭头显眼的簇被标示成为SP和HD字段彼此之间的相异。(j)箱终点站绘成表明了在SP(杂色)和HD(灰点)第各别中所，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相比较较核反应素(比重)。(k)直方绘成表明每个簇的遗传基因(粉红色)和Treg标示成相比较较解读与时代背景解读(粉红色);上列，寄存器Treg_3;示例一行，寄存器Treg_4。时代背景与所有其他簇中所标示成的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

绘成3 与健康献血者相比较，方面比更快者清醒treg的GITR减不及。每个清醒CD4+T肝细胞元簇(清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个解读标示成的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的解读热绘成(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR解读串联，表明直方绘成(c)和概述绘成(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橙色)所有NADPH包括，p< 0.05(粉红色)NADPHSP 606和意味着的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR解读，从分级具微联，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(橙色)串联，表明直方绘成(e)和概述绘成(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

绘成4 来自比更快方面的CD4+ treg肝细胞控制震荡CD4+T肝细胞的意志力降低。SP第各别用粉红色的终点站和红色对此，HD第各别用黑色的终点站和红色对此，橙色的终点站/红色对此NADPHsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标示成为CFSE, Treg按注意到的比重指示剂。用抗CD3 /28微珠酪氨酸肝细胞，培育3天内顺利进行流式肝细胞忍术检验。(a-d)与CD4+此番者相比较较应将的treg培育(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止平均值。适用无病症依此(作用于的响应将肝细胞含treg)计算出来抑止平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘成5 震荡CD4+T肝细胞对比更快方面的T肝细胞酪氨酸的抑止更亦然端。SP第各别用粉红色的终点站和红色对此，HD第各别用黑色的终点站和红色对此，橙色的终点站/红色对此NADPHsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标示成，treg按注意到的比重指示剂。用抗CD3 /28微珠酪氨酸肝细胞，培育3天内顺利进行流式肝细胞忍术(CD25反染)和肝细胞因弟统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止三份(b)。(c,d) CD25抑止三份(c)和CD134抑止三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中所的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们得成的论点是，来自比更快方面弟的酪氨酸清醒CD4+Treg在GITR解读中所得到了扩充和丰沛，忽视了全面性研究成果Treg在1改型哮喘风险生物微中所的举例来说的更全面性。

注解成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28